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細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一

更新時間:2022-10-31      點擊次數(shù):1069
  細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存,可以使細(xì)胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來,這樣在需要的時候再復(fù)蘇細(xì)胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細(xì)胞,可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件而使細(xì)胞丟種,起到了細(xì)胞保種的作用。除此之外,還可以利用細(xì)胞凍存的形式來購買、寄贈、交換和運送某些細(xì)胞。細(xì)胞凍存時向培養(yǎng)基中加入保護劑--終濃度5%.15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO),可使溶液冰點降低,加之在緩慢凍結(jié)條件下,細(xì)胞內(nèi)水分透出,減少了冰晶形成,從而避免細(xì)胞損傷。采用"慢凍快融"的方法能較好地保證細(xì)胞存活。標(biāo)準(zhǔn)冷凍速度開始為-1到-2℃/min,當(dāng)溫度低于-25℃時可加速,到-80℃之后可直接投入液氮內(nèi)(-196℃)。免疫細(xì)胞凍存液一次加多少通用型細(xì)胞凍存液配方是多少?
  流凍存液。同時這樣的保護劑也被積極用于生物研究中,用于保存活的生物材料等等。很多年來,人們使用甘油(Glycerol),利用它能在液氮的溫度下對血液細(xì)胞和公牛精子的凍存保存的作用,然而它卻不能讓整個組織免受凍存過程的損傷。而對于凍存液來說,它之所以能夠保護生物材料免受凍存損傷的原因主要是來源于下面兩個方面:雖然一些或組織能夠耐受細(xì)胞外的冰晶,但是在凍存過程的中如果在細(xì)胞內(nèi)形成了任何微小冰晶時對細(xì)胞來說都是致命的。
  解凍解凍后,應(yīng)該立即鋪板在預(yù)先包被好的培養(yǎng)皿中。開始之前,提前準(zhǔn)備好以下材料:試管,恢復(fù)至室溫的培養(yǎng)基,預(yù)先包被的培養(yǎng)板,確保整個解凍復(fù)蘇程序可以在較短的時間內(nèi)完成。注意:不要在37°C水浴中加熱培養(yǎng)基。1.在37°C水浴中快速解凍,持續(xù)溫和的在水中晃動凍存管,直到剩余少量細(xì)胞還處于結(jié)冰狀態(tài)。2.水浴中取出凍存管,用70%的酒精或異丙醇擦拭除菌。3.用2mL的血清移液管把細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到一個15mL的錐形試管。注意:用2mL的血清移液管代替1mL的頭可以減少細(xì)胞聚集體的分解。無血清快速細(xì)胞凍存液加入適量的細(xì)胞凍存液于離心管中,調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度至1~5×106/ml。
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