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預(yù)染蛋白Mark操作使用方法

更新時(shí)間:2018-02-27      點(diǎn)擊次數(shù):3820

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EZ Mark彩色預(yù)染蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)(10-180KD)

D1009L1253

250 μL

-20

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

EZ Mark彩色預(yù)染蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)包含了從10k到180k共10種高度純化并預(yù)染的重組蛋白質(zhì)(10, 17, 25, 33, 40, 53, 70, 95, 130, 180k, 均帶His標(biāo)簽),其中70kD條帶為橙色,10k為綠色,其余條帶為藍(lán)色,適合作為SDS-PAGE和Western的蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)。本彩色預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)已經(jīng)配制在1×SDS-PAGE上樣緩沖液中,直接使用,不要煮沸、稀釋,也不需要加入還原劑處理。

根據(jù)上樣孔的大小,EZ Mark彩色預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)通常每次上樣5-10微升(5×1.5mm膠孔5μL足夠),即可在電泳時(shí)、電泳后和轉(zhuǎn)膜后觀察到非常清楚的蛋白條帶。

使用方法

1. 室溫下解凍后輕輕混勻或者是用移液槍緩慢吹打均勻,不要煮沸。

2. 取本產(chǎn)品5ul與實(shí)驗(yàn)樣品同時(shí)進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳;

注:用戶可以根據(jù)目標(biāo)蛋白濃度、實(shí)驗(yàn)條件和實(shí)驗(yàn)習(xí)慣通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定合適的上樣量,可以節(jié)約成本,獲得更佳實(shí)驗(yàn)圖片。

保存條件

冰袋運(yùn)輸,-20℃長(zhǎng)期保存,或4℃短期保存。

注意事項(xiàng)

  1. Page膠內(nèi)孔徑隨膠度變化,在低濃度膠時(shí),小分子量的蛋白標(biāo)準(zhǔn)遷移速度大于指示劑,會(huì)泳動(dòng)于染料前緣,大小分質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)間距也相對(duì)較小。
  2. 在做Western blot時(shí),大分子量蛋白需要更長(zhǎng)的轉(zhuǎn)膜時(shí)間或更高轉(zhuǎn)膜的壓,蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)也是如此。
  3. 購(gòu)置凍干Marker產(chǎn)品的客戶,如果需要自己配制凍存液,可參考配方:

儲(chǔ)存液:67 mM Tris-H3PO4, pH7.5, 5mM EDTA, 2 % (W/V) SDS, 33 % (V/V) Glycerol, 0.02 % (V/V) proclin300

     4.預(yù)染蛋白質(zhì)因染料與蛋白結(jié)合,在不同的緩沖體系下,染料分子所帶電荷可能會(huì)有不同,因而表現(xiàn)為不同緩沖體系下有不同的表觀分子量。EZ Mark彩色預(yù)染蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)在Trisglycine (Tris-甘氨酸體系,zui為常用)和BisTrisMops體系下表觀分子量如下圖。 如用其他緩沖體系,可事先用非預(yù)染蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)大致確定EZ Mark彩色蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)的表觀分子量。

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